Identification, tri et profilage des cellules tueuses fonctionnelles via la capture de cibles fluorescentes

Nature Biomedical Engineering (2023)Citer cet article

dixAltmétrique

Détails des métriques

Les tests permettant d'évaluer la cytotoxicité à médiation cellulaire sont largement centrés sur les cellules cibles et ne peuvent pas identifier et isoler des sous-populations de cellules effectrices cytotoxiques. Nous décrivons ici un test compatible avec la cytométrie en flux pour l’identification et le tri précis des sous-populations de cellules tueuses fonctionnelles dans les co-cultures. Le test, que nous avons nommé PAINTKiller (pour « identification par transfert intracellulaire par affinité de proximité des cellules tueuses »), repose sur la détection d'une protéine fluorescente intracellulaire « peinte » par une cellule lysée à la surface de la cellule cytotoxique en cours de lyse (en particulier, sur la cellule lyse le dérivé intracellulaire de fluorescéine, l'ester succinimidylique de carboxyfluorescéine est capturé à la surface de la cellule tueuse naturelle par un anticorps contre l'isothiocyanate anti-fluorescéine lié à un anticorps contre le récepteur de surface pan-leucocytaire CD45). Le test peut être intégré au séquençage d’ARN unicellulaire pour l’analyse des voies moléculaires associées à la cytotoxicité cellulaire et peut être utilisé pour découvrir des corrélats de réponses immunitaires fonctionnelles.

Ceci est un aperçu du contenu de l'abonnement, accès via votre institution

Accédez à Nature et à 54 autres revues Nature Portfolio

Obtenez Nature+, notre abonnement d'accès en ligne au meilleur rapport qualité-prix

29,99 $ / 30 jours

annuler à tout moment

Abonnez-vous à cette revue

Recevez 12 numéros numériques et un accès aux articles en ligne

99,00 $ par année

seulement 8,25 $ par numéro

Louer ou acheter cet article

Les prix varient selon le type d'article

à partir de 1,95 $

à 39,95 $

Les prix peuvent être soumis aux taxes locales qui sont calculées lors du paiement

Les ensembles de gènes de marque sélectionnés sont accessibles au public dans la base de données de signatures moléculaires (MSigDB, v.7.4). Les données de séquençage de PAINTKiller-seq sont disponibles dans la base de données GEO, avec le numéro d'accès GSE207508. Toutes les données nécessaires pour évaluer les conclusions décrites dans ce document sont incluses dans le document et ses informations supplémentaires. Les ensembles de données brutes et analysées générés au cours de l'étude sont disponibles à des fins de recherche auprès des auteurs correspondants sur demande raisonnable. Les données sources sont fournies avec ce document.

Le code R permettant de reproduire les analyses présentées dans les figures est disponible sur Zenodo à l'adresse https://doi.org/10.5281/zenodo.8004120.

Kagi, D., Ledermann, B., Burki, K., Zinkernagel, RM & Hengartner, H. Mécanismes moléculaires de la cytotoxicité médiée par les lymphocytes et leur rôle dans la protection immunologique et la pathogenèse in vivo. Ann. Révérend Immunol. 14, 207-232 (1996).

Article CAS PubMed Google Scholar

Prager, I. & Watzl, C. Mécanismes de cytotoxicité cellulaire à médiation cellulaire tueuse naturelle. J. Leukoc. Biol. 105, 1319-1329 (2019).

Article CAS PubMed Google Scholar

Brunner, KT, Mauel, J., Cerottini, JC & Chapuis, B. Test quantitatif de l'action lytique des cellules lymphoïdes immunitaires sur des cellules cibles allogéniques marquées au 51Cr in vitro ; inhibition par les isoanticorps et par les médicaments. Immunologie 14, 181-196 (1968).

CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Sepp, A., Binns, RM & Lechler, RI Protocole amélioré pour la détection colorimétrique de la cytotoxicité médiée par le complément basée sur la mesure de l'activité cytoplasmique de la lactate déshydrogénase. J. Immunol. Méthodes 196, 175-180 (1996).

Article CAS PubMed Google Scholar

Wong, P., Wagner, JA, Berrien-Elliott, MM, Schappe, T. & Fehniger, TA Test de cytotoxicité des cellules NK murines ex vivo basé sur la cytométrie en flux. Protocole STAR. 2, 100262 (2021).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar